
تعداد نشریات | 22 |
تعداد شمارهها | 485 |
تعداد مقالات | 5,045 |
تعداد مشاهده مقاله | 9,291,042 |
تعداد دریافت فایل اصل مقاله | 6,135,414 |
رو ش¬های همسانه سازی ژن بدون آنزیم لیگاز | ||
دوفصلنامه فن آوری زیستی در کشاورزی | ||
مقاله 7، دوره 3، شماره 1، خرداد 1391، صفحه 51-61 اصل مقاله (509.3 K) | ||
نوع مقاله: مقاله پژوهشی | ||
نویسندگان | ||
اصغر میرزائی اصل* 1؛ محمد رضا عبداللهی2 | ||
1استادیار گروه بیوتکنولوژی، دانشکده کشاورزی، دانشگاه بوعلی سینا، همدان | ||
2استادیار گروه زراعت و اصلاح نباتات، دانشکده کشاورزی، دانشگاه بوعلی سینا، همدان | ||
چکیده | ||
همسانهسازی قطعه DNA موردنظر داخل یک ناقل پلاسمیدی، یکی از مراحل تکنولوژی DNA نوترکیب است. در روشهای معمول برای همسانهسازی به آنزیم لیگاز و آنزیمهای برشی نیاز است که با محدودیتهایی مواجه هستند. راهکارهای متعددی برای ایجاد و اتصال دو قطعه DNA مستقل بدون استفاده از آنزیم لیگاز توسعه یافتهاند که از موفقترین آنها فناوریهای گیتوی و یوزرفرندلی هستند. فناوری گیتوی روشی سریع و مؤثر برای همسانهسازی بر اساس خصوصیتهای نواحی ویژه نوترکیبی باکتریوفاژ لامبدا است. در این فناوری، اجزای سیستم نوترکیب این ویروس برای ایجاد یک سیستم کارآمدتر تغییر یافتهاند. نوترکیبی بین نواحی ویژه اتصال رخ میدهد که دو طرف قطعه DNA را احاطه میکنند. در این فناوری توالی DNA مورد نظر ابتدا در یک ناقل به نام ناقل ورودی همسانهسازی میشود. پس از ایجاد کلون ورودی، انتقال قطعه DNA به ناقلهای دیگر با واکنش نوترکیبی یک ساعته و بدون استفاده از آنزیمهای برشی و آنزیمهای اتصال دهنده لیگاز بهراحتی انجام میگیرد. در فناوری یوزرفرندلی از آغازگرهایی استفاده میشود که دارای توالی ناقل هستند و یک نوکلئوتید داکسی اوریدین دارند و DNA هدف را با پلیمرازی نظیر تک پلیمراز تکثیر میکنند. محصول PCR با مخلوط آنزیمی ویژهای تیمار میشودکه انتهای 3َ تک رشتهای بر روی قطعات DNA تکثیر شده با PCR ایجاد میکند. با این عمل قطعات DNA داری دنبالههای تک رشتهای طویلتر از محصولاتی هستند که با آنزیمهای برشی ایجاد میشوند و برای اتصال به ناقل به آنزیم لیگاز نیازی نیست. با تغییر در طراحی آغازگرها در این روش همسانهسازی به راحتی دستکاریهای مختلف DNA امکانپذیر است. در این مقاله به جنبههای کلیدی و مزایای این روشها پرداخته شده است. | ||
کلیدواژهها | ||
همسانهسازی ژن؛ فناوری گیت¬وی؛ فناوری یوزرفرندلی | ||
آمار تعداد مشاهده مقاله: 5,548 تعداد دریافت فایل اصل مقاله: 5,109 |